目前，研究人員們常通過(guò)靶點(diǎn)分析對(duì)癌癥靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)而了解和控制其調(diào)控機(jī)制，以及在癌癥特征中所起的作用。自噬（Autophagy）是一種應(yīng)激誘導(dǎo)的保護(hù)機(jī)制，該機(jī)制在基礎(chǔ)條件下并不活躍，當(dāng)受到某些負(fù)面條件影響，如營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡和化學(xué)或遭受環(huán)境壓力時(shí)，真核細(xì)胞通過(guò)溶酶體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)容物的大量降解來(lái)利用該機(jī)制。

自噬活動(dòng)的增加在癌癥、神經(jīng)變性疾病、心血管疾病和糖尿病等疾病的病理學(xué)研究中的作用，目前已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可和普遍研究。如果機(jī)體的溶酶體功能受到抑制，阻止了自噬小泡的去除，那么就可以通過(guò)增加的自噬小泡積聚量來(lái)體現(xiàn)自噬通量的誘導(dǎo)效果。

Enzo的熱銷(xiāo)產(chǎn)品CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0（貨號(hào)：ENZ-KIT175），使用了新型染料來(lái)檢測(cè)自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞的自噬通量，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。488 nm可激發(fā)的綠色染料已經(jīng)過(guò)了功能優(yōu)化，不染色溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無(wú)需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。該試劑盒還包括用于核染色的Hoechst 33342染料、自噬誘導(dǎo)劑（Rapamycin）和溶酶體抑制劑（Chloroquine）。

作用機(jī)制：

CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0所用探針是一種陽(yáng)離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，它能以類(lèi)似誘導(dǎo)磷脂藥物的方式迅速進(jìn)入到細(xì)胞中，并選擇性標(biāo)記特定的功能分子。

在Enzo升級(jí)版的CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0試劑盒中，采用了優(yōu)化后的新型探針，不易在溶酶體中發(fā)生積聚的同時(shí)，還能夠?qū)εc自噬途徑相關(guān)的小泡進(jìn)行特異性地標(biāo)記。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 更明亮，更耐光，特異性地染色自噬小泡；

● 操作便捷，無(wú)需轉(zhuǎn)染；

● 反應(yīng)迅速，孵育時(shí)間只需30分鐘；

● 對(duì)自噬性溶酶體的染色效果微乎其微，可以忽略不計(jì)，大大降低了背景對(duì)染色效果呈現(xiàn)的干擾；

● 能夠快速量化原生異質(zhì)性細(xì)胞群中的自噬；

● 有助于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑；

● 業(yè)界認(rèn)可度高，產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用率高。

產(chǎn)品實(shí)例：

Figure 1. 基于流式細(xì)胞儀的Jurkat細(xì)胞的自噬分析圖。Jurkat細(xì)胞不進(jìn)行處理或分別用0.5µM雷帕霉素（RAP）、10µM氯喹（CLQ）或兩者同時(shí)處理20小時(shí)。用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30分鐘后，清洗細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。結(jié)果以直方圖疊加的形式呈現(xiàn)，用RAP+CLQ共同處理的細(xì)胞熒光明顯增強(qiáng)。

Figure 2. HeLa細(xì)胞在(A)完-全培養(yǎng)基或(B)含有40 µM氯喹的饑餓培養(yǎng)基（EBSS）中培養(yǎng)4小時(shí)后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進(jìn)行染色。在含有氯喹的EBSS中的饑餓細(xì)胞顯示出非常明亮的綠色熒光信號(hào)和斑點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。

Figure 3. HepG2細(xì)胞自噬的微孔板分析。HepG2細(xì)胞在DMSO (control)、0.5 μM雷帕霉素(Rap)、10 μM氯喹(CLQ)或0.5 μM Rap+10 μM CLQ中培養(yǎng)20小時(shí)后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進(jìn)行染色。細(xì)胞用Hoechst 33342染色后進(jìn)行細(xì)胞數(shù)歸一化，通過(guò)CYTO-ID® Green Detection Reagent 2檢測(cè)出Rap+CLQ處理組的細(xì)胞自噬增加。

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品最新引用文獻(xiàn)：

1. Amorfrutin B Protects Mouse Brain Neurons from Hypoxia/Ischemia by Inhibiting Apoptosis and Autophagy Processes Through Gene Methylation- and miRNA-Dependent Regulation: K. Przepiórska, et al.; Mol. Neurobiol. 60, 576 (2023), Abstract;

2. Brain injury accelerates the onset of a reversible agerelated microglial phenotype associated with inflammatory neurodegeneration: R.M. Ritzel, et al.; Sci. Adv. 9, eadd1101 (2023), Abstract;

3. CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci. 26, 217 (2023), Abstract;

4. Effects of Sirolimus treatment on patients with β-Thalassemia: Lymphocyte immunophenotype and biological activity of memory CD4+ and CD8+ T cells: M. Zurlo, et al.; J. Cell. Mol. Med. 27, 353 (2023), Abstract;

5. Impaired Autophagy in Krabbe Disease: The Role of BCL2 and Beclin-1 Phosphorylation: N. Papini, et al.; Int. J. Mol. Sci. 23, 5984 (2023), Abstract;

6. Nanoparticles of folic acid-methyl-b-cyclodextrin (FA-MbCD)/adamantane-albumin exhibit enhanced antitumor activity compared with FA-MbCD alone: A. Sakai, et al.; FEBS Open Bio 13, 233 (2023), Abstract;

7. Novel hydroxamic acid derivative induces apoptosis and constrains autophagy in leukemic cells: M.A. Fischer, et al.; J. Adv. Res. (2023), Abstract;

8. Production and Characterization of K562 Cellular Clones Hyper-Expressing the Gene Encoding α-Globin: Preliminary Analysis of Biomarkers Associated with Autophagy: M. Zurlo, et al.; Genes 14, 556 (2023), Abstract;

9. Short peptide domains of the Wnt inhibitor sFRP4 target ovarian cancer stem cells by neutralizing the Wnt β-catenin pathway, disrupting the interaction between β-catenin and CD24 and suppressing autophagy: S.M. Sundaram, et al.; Life Sci. 16, 121384 (2023), Abstract;

10. Surface-Modified Inhaled Microparticle-Encapsulated Celastrol for Enhanced Efficacy in Malignant Pleural Mesothelioma: X. Wang, et al.; Int. J. Mol. Sci. 24, 5204 (2023), Abstract;

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